PCR核酸檢測試劑盒的檢驗(yàn)原理:
PCR核酸檢測試劑盒選取EB病毒基因組BamH1W基因設(shè)計(jì)特異性引物和探針,在樣本DNA核酸純化之后采用熒光PCR對病毒DNA進(jìn)行檢測。
PCR核酸檢測試劑盒采用煮沸裂解法提取病毒DNA模板,然后在Taq酶的作用下對
靶區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增,同時(shí)利用Taqman熒光探針技術(shù)實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增產(chǎn)物的累積。Taqman探針帶有一個(gè)熒光發(fā)光基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán),完整的探針在特定光源激發(fā)下,發(fā)光基團(tuán)所產(chǎn)生的熒光被淬滅基團(tuán)全部吸收,樣品無熒光。PCR過程中,Taq酶在延伸DNA鏈的同時(shí),可通過自身的5’→3’核酸外切酶活性降解與模板結(jié)合的特異性熒光探針,使熒光報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,分離后的熒光報(bào)告基團(tuán)在特定光源激發(fā)下產(chǎn)生熒光。通過監(jiān)測整個(gè)PCR過程熒光信號的變化,對未知模板進(jìn)行定性分析。
同時(shí)PCR核酸檢測試劑盒采用內(nèi)標(biāo)質(zhì)控體系,用于監(jiān)測反應(yīng)體系可能存在的抑制因素。內(nèi)標(biāo)模板與靶基因無同源性,內(nèi)標(biāo)探針選擇的是與靶基因探針沒有沖突的另一檢測通道。
注:1)不同批號試劑盒中各組分不可以互換。
2)PCR核酸檢測試劑盒以外必需的設(shè)備及材料:試劑盒以外必需的設(shè)備及材料:熒光定量PCR儀、旋渦混合器、生物安全柜、迷你離心機(jī)、干式恒溫儀或水浴鍋、移液器及無菌吸頭、離心機(jī)及無菌離心管、PCR反應(yīng)管、無粉乳膠手套。